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手把手教学——酵母双杂交(Y2H)实验操作指南

1、酵母双杂交实验操作指南如下：实验准备 载体构建：使用pGBKT7作为bait载体，该载体包含GAL4 DNA结合域和目标蛋白的编码序列。使用pGADT7作为prey载体，携带GAL4激活域和待检测蛋白的编码序列。

北京2、实验操作分为两大部分：酵母感受态细胞的制备和质粒转化。制备步骤如下：从保存的酵母菌株中挑选并培养单菌落，逐步增加培养液，控制生长速度，然后离心并重悬于预热培养液中。经过一系列离心和洗涤步骤，最终得到高效感受态细胞。

3、首先，介绍酵母双杂交技术（Y2H）。Y2H技术通过将待研究的两种蛋白质克隆到酵母表达质粒的转录激活因子的DNA结合结构域和转录激活域上，借助这两个结构域的结合来调控目的基因的转录过程。该技术操作简单、成本较低、快速筛选蛋白互作组，且灵敏度高，可检测微弱或暂时蛋白相互作用。

北京4、酵母双杂交的多种系统原理概括如下图所示，蛋白质X（深蓝色拼图块，诱饵构建体的一部分）和蛋白质Y（浅蓝色拼图块，猎物构建体的一部分）直接相互作用（装配拼图块），从而诱导分裂蛋白质的重建（A、D、E中不同颜色的拼图块）、膜募集（B、C）或蛋白质二聚化（F）。

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